Ce que l'on voit au microscope · Fluorescence

Ce que l'on voit avec un microscope à fluorescence

Une couche de cellules endothéliales marquée par trois colorants fluorescents, comme la préparation commerciale FluoCells n° 1 : DAPI dans les noyaux, phalloïdine couplée à l'Alexa Fluor 488 sur l'actine et MitoTracker Red CMXRos dans les mitochondries. Chaque colorant absorbe une couleur de lumière et en émet une autre, de longueur d'onde plus grande.

Changez de filtre dans le panneau : UV, bleu ou vert.

100× : la couche de cellules

Les cellules endothéliales forment une couche de cellules plates, les unes à côté des autres, comme un pavage. Avec le filtre bleu, on voit leur squelette d'actine.

400× : un filtre, un colorant

Sous lumière UV de 365 nm, les noyaux brillent en bleu (DAPI). Sous lumière bleue de 485 nm, l'actine brille en vert (phalloïdine). Sous lumière verte de 525 nm, les mitochondries brillent en rouge (MitoTracker). Le filtre d'émission laisse passer la lumière émise par le colorant et bloque celle qui l'éclaire.

1000× : filaments et mitochondries

Avec l'objectif à immersion, on distingue les filaments d'actine et les mitochondries une à une. Si l'on laisse la lumière allumée, la fluorescence s'éteint peu à peu : c'est le photoblanchiment.

Une cellule, de près

Le noyau, le squelette d'actine et les mitochondries, chacun avec son colorant. Au microscope, on les voit séparément, un avec chaque filtre.

Vue en 3D : au microscope, on la voit à plat, depuis le dessus.

Quel microscope à fluorescence vous faut-il ?

Il faut une source de lumière d'excitation et un jeu de filtres pour chaque colorant. Ceux qui indiquent la fluorescence dans leur fiche ont des LED UV, bleue et verte avec leurs filtres.